Антинуклеарный фактор (АНФ) и тип свечения ядра

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) на НЕр-2 клетках (тест 01.02.15.005) представляет собой основной метод выявления антинуклеарных антител (АНА), позволяющий обнаружить большинство их разновидностей, включая аутоантитела к нуклеиновым кислотам (двуспиральной ДНК, односпиральной ДНК, РНК), конформационным и нерастворимым антигенам. Результатом определения АНФ является выявление факта присутствия аутоантител в диагностическом титре, конечный титр разведения сыворотки, отражающий аффинность и концентрацию аутоантител, а также тип свечения ядра клетки. Характеристики конкретной методики зависят, прежде всего, от выбора субстрата, который может быть представлен криосрезами (крысиных печени или почки) или культивируемыми пролиферирующими клеточными линиями (Hep2, Kb, HeLa), а также от метода фиксации ткани, который может влиять на сохранность ряда ядерных антигенов АНА. Исторически использовался ряд клеточных и тканевых субстратов для выявления АНФ, но в настоящее время, повсеместно используется клеточная линия эпителиоидных клеток аденокарциномы гортани человека HEp2.

История разработки тестов для выявления антинуклеарных антител

В начале ХХ века в ряде исследований были впервые выявлены «гиалиновые тельца» в цитоплазме лейкоцитов. В 1948 году Hargraves, Richmond, Morton разработали метод, позволивший обнаружить и описать LE-клетки, представляющие собой лейкоциты, содержащие фагоцитированные ядра разрушенных лейкоцитов,путем длительной инкубации лейковзвеси больных системной красной волчанкой invitro. Два года спустя, в 1951, группа ученых Lee, Michael и Vural обнаружили сывороточный фактор, стимулирующий фагоцитоз ядер лимфоцитов лейкоцитами периферической крови. В 1957 году для выявления антинуклеарного фактора на криосрезах печени человека Holoborow, Weir и Johnson использовали метод непрямой иммунофлюоресценции, разработанный Coons в 1950 году. Позже, в 1958 году Jones обнаружил в крови больных синдромом Шегрена фактор, способный преципитировать экстракты ядер клеток, что послужило толчком для описания большинства разновидностей антинуклеарных антител. Проводился и дальнейший поиск оптимального субстрата для выявления антинуклеарных антител. Так, в 1961 году, Beck использовал ткани лабораторных животных. В 1982 году E. Tan впервые провел исследование антинуклеарного фактора на перевиваемой клеточной линии человека HEp-2, и впоследствии данный метод стал «золотым стандартом» выявления антинуклеарных антител.

Метод непрямой иммунофлюоресценции на перевиваемой клеточной линии Нер2

Данный метод выявления АНФ был разработан Таном (Tan, 1982), применившим в качестве субстрата человеческую перевиваемую эпителиоидную клеточную линию HEp-2 (ATCC ref.no. CCL-23). Эта клеточная линия, полученная из аденокарциномы гортани человека, представляет собой крупные полиплоидные неороговевающие плоские эпителиоциты, образующие монослой на пластике и стекле.

Рисунок 1. Клетки клеточной линии НЕр-2, окрашенные гематологическим красителем

Сравнительная неприхотливость этой линии, крупные ядра и присутствие всех человеческих антигенов сделало метод непрямой иммунофлюоресценции с использованием перевиваемой клеточной линии НЕр-2 основным методом обнаружения АНФ. В англоязычной литературе отсутствует единое название для этого метода, иногда этот метод для краткости обозначают как FANA (Fluorescent AntiNuclear Antibody detection). Отсутствие единства номенклатуры породило путаницу в названии лабораторных тестов. Иногда под термином «антинуклеарные антитела» иммунологические лаборатории понимают как тесты, основанные на методах иммуноферментного и иммунохимического анализа, так и те, в основе которых лежит метод иммунофлюоресценции. В русскоязычной литературе считается необходимым сохранить отечественное название этого показателя - «антинуклеарный фактор» (АНФ) - для проведения различия между иммунофлюоресцентным методом и другими тестами для обнаружения АНА.

Необходимо выявлять АНФ класса IgG, так как выявление АНФ, представленного другими классами иммуноглобулинов, не имеет самостоятельного диагностического значения. В процессе проведения анализа стандартные разведения сыворотки больного инкубируются с тканевым субстратом, что позволяет антинуклеарным антителам из сыворотки связаться с соответствующими ядерным мишенями. В дальнейшем, места связывания аутоантител детектируются с помощью античеловеческой сыворотки, меченой флюоресцеином.

Рисунок 2. Схема метода непрямой иммунофлюоресценции для выявления антинуклеарного фактора

Хотя в качестве субстрата могут применяться и другие человеческие клеточные линии, благодаря хорошей морфологии и удобству культивирования именно линия Нер-2 стала общепризнанным оптимальным субстратом для реакции непрямой иммунофлюоресценции. Ее применение улучшает чувствительность теста за счет яркой флюоресценции даже при значительных разведениях сыворотки больного, а большое, богатое эухроматином ядро позволяет точно описать тип свечения. Кроме того, применение клеточной линии Hep-2 способствует обнаружению антител Ro/SS-A, а также антител к антигенам ядрышка, которые плохо видны при использовании криосрезов ткани лабораторных животных. Среди других преимуществ HEp-2 следует отметить высокую частоту деления клеток, позволяющую выявлять антитела к антигенам, которые экспрессируются только при делении клетки, и отсутствие клеточного матрикса ткани, затрудняющего визуализацию специфического свечения при сравнении с гистологическими срезами. На отечественном рынке реактивы для определения АНФ представлены рядом производителей, например Euroimmun AG (Германия), Immco (США), BioSystems, (Испания), Medipan AG (Германия). Субстраты несколько варьирую по числу клеточных делений, а также возможность совместного иммунофлюоресцентного исследования в одном реакционном поле других субстратов.

Титры антинуклеарного фактора

Титр АНФ определяется как последнее разведение сыворотки больного, при котором отмечается четкая флюоресценция ядер клеток. На основании титрования может быть определен уровень антител, и эта информация ассоциирована с  клинической значимостью результата теста. Высокие уровни антител в большей степени ассоциированы с системными аутоиммунными заболеваниями, а также антигенная специфичность АНА в высоких титрах чаще подтверждается при дальнейшем тестировании.

При использовании тканей лабораторных животных диагностический титр АНФ составляет 1:8-1:10, в то время как при использовании клеточной линии НЕр-2 рекомендуется использовать исходный титр 1:80. В этом случае в норме титры АНФ составляют менее 1:160.При использовании титров менее 1:160 частота слабоположительных результатов у клинически здоровых лиц составляет не более 5% и, в то же время, не пропускаются значимые титры АНА у больных диффузными болезнями соединительной ткани.

Для определения конечного титра обычно используется титрование шагом x2 (1:160-1:320 - 1:640 - 1:1280 – 1:2560 – 1:5120 и т.д.). Может использоваться и более грубое титрование, например 1:10-1:100-1:1000-:1:10000. На фоне обострения ревматических заболевания обычно отмечаются титры АНФ более 1:640, а при ремиссии титры снижаются до 1:160-1:320. Принята также запись титра через "/", например 1/320 или 1/1280... Все чаще титры записывают величиной обратной разведению сыворотки, в таком случае форма записи титра антинуклеарного фактора принимает вид <160 - 160 - 320 - 640 - 1280 - 2560 - 5120 - 10240 - и т.д.

Существуют рекомендации по бальной оценке результатов выявления АНФ, указывающей содержание «в крестах». Это позволяет лабораториям экономить реактивы и уменьшить трудозатраты на выполнение исследований. В этом случае определение конечного титра не представляется возможным. Необходимо учитывать, что конечный титр имеет более важное значение по сравнению с количеством связавшихся с субстратом аутоантител, так как непосредственно связан с аффинностью их взаимодействия с антигеном. Желательно определять конечный титр у всех положительных больных, что позволяет уточнить присутствие в сыворотке высокоаффинных аутоантител, которые более тесно связаны с активностью процесса.

Тип свечения ядра антинуклеарного фактора

Уже в первом опыте клинического применения непрямой иммунофлюоресценции для выявления АНФ с использованием криосрезов тканей лабораторных животных было отмечено, что сыворотка больных аутоиммунными заболеваниями по-разному «окрашивала» ядра клеток, что приводило к селективному свечению некоторых структур ядра. Уточнение этого феномена привел к описанию так называемых «типов свечения» ядра в иммунофлюоресцентном тесте. Это связано с тем, что каждая разновидность АНА имеет конкретные клеточные мишени, вследствие чего тип свечения ядра, ядрышка и цитоплазмы клетки отражает взаимодействие АНА сыворотки больного с антиген-содержащими структурами внутри клетки. Тип свечения зависит от присутствия конкретных аутоантител в сыворотке крови больного, на основе чего можно сделать предварительное заключение относительно тех разновидностей АНА, которые имеются в данной сыворотке. Распределение антигенов внутри клетки определяет тип свечения ядра, который позволяет судить о спектре АНА, присутствующих в данной сыворотке. Не всегда при наличии даже высоких тиров АНФ можно установить антигенную специфичность АНА, поскольку многие антигены, выявляющиеся с помощью АНФ, относят к конформационным (т. е. нестойким) и до сих пор плохо охарактеризованы. Применение гистологических срезов тканей лабораторных животных не позволяет достоверно установить тип свечения. В то же время, использование перевиваемых клеточных линий, таких как Нер-2, позволяет описать значительное количество вариантов окрашивания ядра и цитоплазмы. Существует три основные группы антигенов, присутствие антител к которым определяет различные типы свечения:

Рисунок 3. Основные антигены антинуклеарных антител

Тип свечения ядра клетки значительно увеличивает информативность выявления АНФ, в связи с чем должен рутинно определяться при определении этого показателя. Использование клеток линии НЕр-2 позволяет охарактеризовать более 20 различных вариантов окрашивания ядра, которые зависят от спектра АНА, присутствующих в исследуемой сыворотке. Однако для практической лаборатории достаточно различать 6 основных вариантов связывания аутоантител с антиген-содержащими структурами клетки.

Рисунок 4. Основные клинически значимые типы свечения антинуклеарного фактора

Выделяют гомогенный, периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы свечения ядра. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого, а также определить набор антигенов, с которыми реагируют аутоантитела в сыворотках больных. Описание типов свечения представляет ценную клиническую информацию, кроме того, тип свечения может указывать на необходимость проведения определенных лабораторных тестов в дальнейшем с целью уточнения антигенной специфичности выявленных АНА. Однако некоторые типы свечения сами по себе несут необходимую клиническую информацию для постановки диагноза, как, например, центромерный тип свечения включен в классификационные критерии ССД, в то время как ядерный  плотный мелкогранулярный тип свечения, ассоциированный с DFS-70 антигеном, чаще выявляется у здоровых людей и свидетельствует об отсутствии системного аутоиммунного заболевания.

 

Рисунок 5. Основные клинически значимые типы свечения антинуклеарного фактора

При гомогенном типе свечения аутоантитела реагируют с антигенами, распределенными в ядре диффузно, то есть входящими в состав хроматина. При гомогенном типе свечения в делящихся клетках характерно ярко окрашиваются конденсированные хромосомы. Основными структурными единицами хроматина являются нуклеосомы - комплексы ДНК и гистонов. Таким образом, гомогенный тип свечения предполагает наличие антител против нуклеосом, двуспиральной ДНК и гистонов. Он встречается у больных с системной красной волчанкой и лекарственной волчанкой, а также у больных со склеродермией. Обычно обнаружение высокого титра АНФ с гомогенным типом свечения указывает на диагноз «системная красная волчанка».

Периферический тип свечения часто выделяют отдельно, хотя он является разновидностью гомогенного типа свечения. Его выявление является артефактом фиксации клеток, что приводит к перераспределению хроматина в ядре на периферию. Важно отличать периферический тип свечения от окрашивания ядерной мембраны, которое отмечается при аутоиммунных заболеваниях печени. Периферический тип свечения обнаруживается у больных с антителами к двуспиральной ДНК и выявляется преимущественно у пациентов с системной красной волчанкой.

Гранулярный тип является наиболее часто встречающимся и, одновременно, наиболее неспецифическим. Иногда этот тип свечения в отечественной литературе называют «крапчатым» или «сетчатым». Название «гранулярный» более точно отражает этот феномен, так как в этом случае аутоантитела реагируют с гранулами в ядре, представляющими надмолекулярные нуклеопротеиновые комплексы. Такие комплексы белков и нуклеиновых кислот осуществляют в ядре ряд функций, необходимых для нормального функционирования клетки. К таким комплексам, в частности, относятся сплайсосомы, которые осуществляют посттранскрипционную перестройку мРНК, необходимую для синтеза белка на рибосомах. В составе присутствует множество различных нуклеопротеинов, что обуславливает многообразие антигенных мишеней при обнаружении гранулярного типа свечения. К основным аутоантигенам, антитела к которым приводят к визуализации гранулярного типа свечения, относят Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA. Клетки в процессе деления утрачивают большинство сформированных нуклеопротеиновых комплексов, поэтому митотические фигуры в клеточной линии при гранулярном типе свечения не окрашиваются. Гранулярный тип свечения ядра отмечается у больных при системной красной волчанке, синдроме Шегрена, системной склеродермии, дерматомиозите, полимиозите, ревматоидном артрите и ряде других аутоиммунных заболеваний. Низкие титры АНФ с гранулярным типом свечения преобладают в сыворотке крови у клинически здоровых лиц с АНФ без признаков системного заболевания.

Выявления очень высоких титров АНФ (1:2560-1:10000) с крупногранулярным типом свечения ядра обычно указывает на диагноз смешанного заболевания соединительной ткани и требует дообследования для выявления RNP-антигена, который является основным серологическим маркером этого заболевания.

Антигены ядрышка могут выступать в качестве мишеней АНА, что приводит к обнаружению ядрышкового типа флюоресценции. Выявление ядрышкового типа свечения характерно для склеродермии и ее разновидностей. Ядрышковый тип флюоресценции определяется у больных при наличии антител к компонентам ядрышка, таким как PHК-полимераза 1, NOR, U₃RNP, PM/Scl.

Центромерный тип флюоресценции отмечается при появлении антител к центромерам хромосом, и обнаруживается только в делящихся клетках. Его присутствие характерно при CREST-варианте склеродермии.

Цитоплазматический тип свечения указывает на наличие антител к тРНК–синтетазам, в частности, к Jo-1, которые отмечаются при полимиозите. Кроме того, он выявляется у больных с АНА, направленными против других компонентов цитоплазмы клетки: антитела к актину при аутоиммунном гепатите, антитела к митохондриям при первичном билиарном циррозе.

Можно охарактеризовать ряд других разновидностей свечения, причем эти типы окрашивания ядра клеток могут быть характерны для конкретной разновидности АНА. Так, антитела к Scl-70 в иммунофлюоресцентном тесте на HEp-20 клетках дают мелкогранулярное окрашивание ядра и ядрышек, анти-р80 - светящиеся точки в ядре, которые отсутствуют в митотических клетках. Однако необходимо отметить редкость и разнообразие таких феноменов, что делает излишним их выявление при рутинных исследованиях.

Нередко может встречаться сочетание нескольких типов свечения, например, мелкогранулярного и ядрышкового, что характерно для антител к Scl-70. Более того, часто в низких разведениях преобладает один тип свечения, например, гранулярный, а при дальнейших разведениях выявляется гомогенный или центромерный типы флюоресценции, что свидетельствует о наличии в сыворотке больного различных видов АНА. Хотя тип свечения дает врачу определенные данные в пользу того или иного диагноза, необходимо принимать во внимание сравнительно низкую его специфичность и разнообразие встречающихся феноменов, что требует дальнейшего лабораторного обследования.

Обнаружение АНФ является основой для использования других лабораторных тестов, уточняющих спектр АНА в крови больных. Учитывая крайнюю информативность этого теста, дальнейшее тестирование и анализ результатов последующего обследования должен интерпретироваться в зависимости от результатов оценки типа свечения и титра АНФ.

Хотя отсутствие значимых титров АНФ практически всегда исключает диагноз активного системного ревматического заболевания, при использовании клеточной линии НЕр-2 у 2-4% больных, удовлетворяющих критериям для диагноза системной красной волчанки, АНА не определяются или титры низки. Этих больных иногда относят к группе «АНФ-негативной системной красной волчанки». Для уточнения диагноза у таких больных требуется дальнейшее обследование, прежде всего, выявление антител к SS-Антигенам. Эти антигены обладают хорошей растворимостью и могут утрачиваться из ядер клеток. Для сокращения этой категории пациентов используется комплексное тестирование, включающее определение антител к экстрагируемым ядерным антигенам, так называемый «скрининг заболеваний соединительной ткани», тест 01.02.15.245. Отрицательный результат такого обследования позволяет с очень высокой вероятностью позволяет исключить диагноз системной красной волчанки и других системных ревматических заболевании.

Современная номенклатура ICAP 2014 типов свечения антинуклеарного фактора

Международная согласительная группа по типам свечения была основана на секции в рамках Международного семинара по Аутоиммунитету и аутоантителам (IWAA) в Сан-Паоло, Бразилии, в 2014 году. Результатом этой работы стало формирование обобщенной номенклатуры и описания типов свечения АНФ, базы микрофотографий, а также классификации с делением на уровни компетентности при оценке типов свечения. Для популяризации результатов работы Согласительной группы ICAP был создан сайт в интернете https://www.anapatterns.org, на котором была представлена номенклатура с подробным описанием типов свечения, которая на сегодняшний день насчитывает 30 типов свечения, включая отрицательный (#AC-0).

Рисунок 6. Номенклатура и схема классификации для нуклеарных, цитоплазматических и митотических типов свечения НРИФ  на субстратах клеток HEp-2

Ядерные типы свечения определяются как любое окрашивание интерфазных ядер HEp-2, независимо от окрашивания митотических клеток (Рисунок 7). В общей сложности 6 основных групп и 11 подгрупп могут быть выделены на основе окрашивания отдельных ядерных компонентов в интерфазных клетках (табл.1). Соответствующая номенклатура в основном основана на особенностях флюоресценции, наблюдаемой в нуклеоплазме и ядерных структурах (см. центромеры или ядрышки).

Таблица 2. Ядерные типы свечения и их ассоциации с аутоантигенами и заболеваниями

Тип свечения	Ассоциация с антигеном	Ассоциации с заболеванием
Гомогенный АС-1	дсДНК, нуклеосомы, гистоны	СКВ, лекарственная волчанка, ювенильный идиопатический артрит
Гранулярные ядерные типы (АС-2,3,4,5 ) включают:
Плотный мелкогранулярный АС-2	DFS70/LEDGF	редко при синдроме Шегрена, ССД и СКВ
Центромерный АС-3	CENP-A/B (C)	Лимитированная кожная форма ССД, ПБЦ
Мелкоганулярный АС-4	SS-A/Ro, SS-B/La, Mi-2, TIF1γ, TIF1β, Ku	Синдром Шегрена, СКВ, дерматомиозит
Крупногранулярный АС-5	hnRNP, U1RNP, Sm, РНК полимераза III	СЗСТ, СКВ, ССД
ДНК-топоизомераза I (topo I) АС-29	ДНК топоизомераза I	Системная склеродермия
Типы свечения точки в ядре (АС-6,7) включают:
Множественные АС-6	Sp-100, белки PML , MJ/NXP-2	ПБЦ, ДБСТ, дерматомиозит
Единичные АС-7	p80-coilin, SMN	Синдром Шегрена, СКВ, ССД, ПМ, лица без симптомов
Ядрышковые типы свечения (АС-8,9,10) включают:
Гомогенный АС-8	PM/Scl-75, PM/Scl-100, Th/To, B23/нуклеофосмин, нуклеолин, No55/SC65	ССД, перекрестный синдром ССД/ПМ
Глыбчатый АС-9	U3-snoRNP/фибрилларин	ССД
Точечный АС-10	РНК полимераза I, hUBF/NOR-90	ССД, синдром Шегрена
Свечение ядерной мембраны (АС-11,12) включают:
Гладкий мембранный АС-11	ламины A,B,C, или  ламин-ассоциированные белки	СКВ, СШ, серонегативный артрит
Точечный мембранный АС-12	Протеиновый комплекс ядерных пор  (i.e. gp210)	ПБЦ
Плеоморфные ядерные типы (АС-13,14) включают:
PCNA  АС-13	PCNA	СКВ, другие состояния
CENP-F  АС-14	CENP-F	Онкологические заболевания, другие состояния

Рисунок 7. Ядерный типы свечения антинуклеарного фактора

Цитоплазматические типы свечения определяются как любое окрашивание цитоплазмы HEp-2, независимо от окрашивания ядер или митотических клеток. Общая схема классификации для цитоплазматических типов свечения представлена на рисунке 6, и изображения показаны на рисунке 8.  Пять основных типов свечения – это фибриллярный, гранулярный, митохондриальный, Гольджи, палочки и кольца (ПК) – рекомендуется выявлять в клинических лабораториях компетентного уровня. Номенклатура основана главным образом на наблюдаемом характерном окрашивании цитоплазмы (см. фибриллярный или гранулярный типы) или цитоплазматической структуры (см. палочки и кольца). Ассоциации с аутоантигенами и болезни приведены в таблице 3.

Таблица 3. Цитоплазматические типы свечения и их ассоциации с аутоантигенами и заболеваниями

Тип свечения	Ассоциация с антигеном	Ассоциации с заболеванием
Фибриллярные цитоплазматические типы (АС-15,16,17) включают:
Линейные волокна в цитоплазме АС-15	Актин, немышечный миозин	СЗСТ, хронический активный гепатит, цирроз печени, миастения гравис, болезнь Крона, ПБЦ, продолжительный гемодиализ, редко при ДБСТ
Фибриллярные нити в  цитоплазме АС-16	Виментин, цитокератин, тропомиозин	Инфекции или воспалительные процессы, продолжительный гемодиализ, алкогольная болезнь печени, ДБСТ, псориаз, здоровые доноры
Фибриллярные сегменты в цитоплазме АС-17	Альфа-актинин, винкулин	Миастения Гравис, болезнь Крона, язвенный колит
Гранулярные цитоплазматические типы  (АС-18,19,20) включают:
Отдельные точки в цитоплазме/GW-подобные тельца в цитоплазме АС-18	GW182, Su/Ago2, * нет молекулярно-биологических данных в поддержку связи данного паттерна с лизосомальными антигенами	ПБЦ, ДБСТ, неврологические и аутоиммунные состояния
Цитоплазматический плотный мелкогранулярный АС-19	PL-7, PL-12, рибосомальный белок P	"антисинтетазный синдром", ПМ/ДМ, СКВ, ювенильная СКВ, нейропсихиатрическая СКВ
Цитоплазматический мелкогранулярный АС-20	Jo-1/гистидил-тРНК-синтаза	«антисинтетазный синдром», ПМ/ДМ, локальная ССД, идиопатический плевральный выпот
Митохондриальный/ретикулярный АС-21	PDC-E2/M2, BCOADC-E2, OGDC-E2, E1α субъединица PDC, E3BP/белок X	Чаще при ПБЦ, ССД, редко при ДБСТ
Полярное свечение/ комплекс Гольджи в цитоплазме АС-22	гиантин/макрогольджин, гольджин-95/GM130, гольджин-160, гольджин-97, гольджин-245	Редко при СШ, СКВ, РА, ДБСТ, гранулематозе Вегенера, идиопатической мозжечковой атаксии, паранеопластической мозжечковой дегенерации, вирусных инфекциях
Палочки и кольца АС-23	IMPDH2	Пациенты с ХГС после ИФН/рибавирин терапии, редко СКВ, тиреоидит Хашимото и здоровые доноры

Таблица 3. Цитоплазматические типы свечения и их  ассоциации с аутоантигенами и заболеваниями

Типы свечения, которые характеризуются свечением клеточных структур, связанных с митозом, классифицируются как митотические типы свечения. Некоторые типы свечения, окрашивающие клеточные компоненты, связанные не только с митозом, классифицируются как митотические типы свечения, если они имеют очень характерное свечение во время митоза (Рисунок 9). Например, центросомы легко распознаются как два ярких пятна в митотической клетке, обычно выровненные по противоположные стороны метафазной пластинки, но в межфазных клетках они выглядят как одно менее яркое и менее специфичное пятно в цитоплазме. Таким образом, свечение центросом было отнесено к митотическим типам свечения. NuMA-подобное свечение  характеризуется как сильное и характерное окрашивание перицентриолярной области и митотического веретена, но также имеет пятнистое окрашивание интерфазных ядер. Поэтому NuMA-подобный тип свечения был классифицирован как митотический тип свечения. Ассоциированные с митотическими типами свечения  аутоантигены и заболевания приведены в таблице 4.

Таблица 4. Митотические типы свечения АНФ и их ассоциации с аутоантигенами и заболеваниями

Тип свечения	Синоним	Ассоциация с антигеном	Ассоциации с заболеванием
Цетросомы AC-24	Свечение центриолей	перицентрин, нинеин, Cep250, Cep110	Редко при ССД, синдроме Рейно, инфекциях (вирусы и микоплазмы)
Веретено деления AC-25	Нет	HsEg5	Редко при ССД, СКВ, других ДБСТ
Numa-подобный AC-26	Свечение MSA-1, свечение центрофилина	NuMA	СКВ,ССД, другие
Межклеточный мостик AC-27	Свечение межзональной области, свечение телец Флемминга	Нет	Редко при ССД, синдроме Рейно, онкологии
Оболочка митотической хромосомы AC-28	Свечение белка хромосомной оболочки, Свечение антигена митотической клетки, Свечение аутоантигена митотической хромосомы (АМХ)	Модифицированный гистон H3, MCA-1	Редко при дискоидной красной волчанке, хроническом лимфоцитарном лейкозе, ССД и ревматической полимиалгии

Рисунок 9. Митотические типы свечения АНФ

Литература

1. Лапин С.В. Выявление антинуклеарных антител: международные рекомендации и собственный опыт / S. V Lapin, A. V Mazing, T. V Bulgakova, O. S. Napalkova, M. Y. Pervakova, I. S. Kholopova, A. L. Maslyansky, A. A. Totolyan – 2014. – Т. 15  – № №3 – 40–45с.
2. Лапин С.В.Антинуклеарные антитела: лабораторные тесты и диагностическое значение / Тотолян. А. А. Лапин С.В. // Медицинская иммунология – 2001. – Т. 3  – № №1 – 35–50с.
3. С.В. Лапин .Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний / А.А. Тотолян, С.В. Лапин / под ред. Человек. – – СПб, 2010.– 272 с.c.
4. Созина А.В. Клинико-диагностическое значение выявления антинуклеарного фактора, антител к двуспиральной днк и кардиолипину у больных системной красной волчанкой / Т. А. А. Созина А.В., Иливанова Е.П., Шульман A.М., Шулъман М.А., Шемеровская Т.Г., Лапин С.В. // Клиническая лабораторная диагностика – 2008. – № 5 – 44–47с.
5. Созина А.В. Сочетанная встречаемость аутоантител у больных с диффузными болезнями соединительной ткани / А. В. Созина, Ю. А. Неустроева, Т. А. Тихомирова, С. В. Лапин – 2007. – Т. 7 – № 812 – 69–76с.
6.  Agmon-Levin N. International recommendations for the assessment of autoantibodies to cellular antigens referred to as anti-nuclear antibodies / N. Agmon-Levin, J. Damoiseaux, C. Kallenberg, U. Sack, T. Witte, M. Herold, X. Bossuyt, L. Musset, R. Cervera, A. Plaza-Lopez, C. Dias, M. José Sousa, A. Radice, C. Eriksson, O. Hultgren, M. Viander, M. Khamashta, S. Regenass, L. E. Coelho Andrade, A. Wiik, A. Tincani, J. Rönnelid, D. B. Bloch, M. J. Fritzler, E. K. L. Chan, I. Garcia-De La Torre, K. N. Konstantinov, R. Lahita, M. Wilson, O. Vainio, N. Fabien, R. A. Sinico, P. Meroni, Y. Shoenfeld // Ann. Rheum. Dis. – 2014.
7. Andrade L.E. Human autoantibody to a novel protein of the nuclear coiled body: immunological characterization and cDNA cloning of p80-coilin / L. E. Andrade // J. Exp. Med. – 2004.
8. Andrade L.E. Immunocytochemical analysis of the coiled body in the cell cycle and during cell proliferation. / L. E. Andrade, E. M. Tan, E. K. Chan // Proc. Natl. Acad. Sci. – 2006.
9. Andrade L.E.C. Two major autoantigen-antibody systems of the mitotic spindle apparatus / L. E. C. Andrade, E. K. L. Chan, C. L. Peebles, E. M. Tan // Arthritis Rheum. – 1996.
10. Basu A. DFS70/LEDGFp75: An enigmatic autoantigen at the interface between autoimmunity, AIDS, and cancer / A. Basu, T. W. Sanchez, C. A. Casiano // Front. Immunol. – 2015.Blaschek M. Anti-"dividing cell antigen" autoantibody: A novel antinuclear antibody pattern related to histones in systemic lupus erythematosus / M. Blaschek, S. Muller, P. Youinou // J. Clin. Immunol. – 1993.
11. Bonaci-Nikolic B. Autoantibodies to mitotic apparatus: Association with other autoantibodies and their clinical significance / B. Bonaci-Nikolic, S. Andrejevic, M. Bukilica, I. Urosevic, M. Nikolic // J. Clin. Immunol. – 2006.
12. Ceribelli A. Anti-MJ/NXP-2 antibodies are the most common specifcity in a cohort of adult caucasian patients with dermatomyositis / A. Ceribelli, M. Fredi, M. Taraborelli, I. Cavazzana, F. Franceschini, A. Tincani, S. J. Ross, B. A. Pauley, E. K. L. Chan, M. Satoh // Ann. Rheum. Dis. – 2012.
13. Chan E.K.L. Report of the First International Consensus on Standardized Nomenclature of Antinuclear Antibody HEp-2 Cell Patterns (ICAP) 2014-2015 / E. K. L. Chan, J. Damoiseaux, O. G. Carballo, K. Conrad, W. de Melo Cruvinel, P. L. C. Francescantonio, M. J. Fritzler, I. Garcia-De La Torre, M. Herold, T. Mimori, M. Satoh, C. A. von Mühlen, L. E. C. Andrade // Front. Immunol. – 2015
14. Chan E.K.L. Report on the second International Consensus on ANA Pattern (ICAP) workshop in Dresden 2015 / E. K. L. Chan, J. Damoiseaux, W. De Melo Cruvinel, O. G. Carballo, K. Conrad, P. L. C. Francescantonio, M. J. Fritzler, I. Garcia-De La Torre, M. Herold, T. Mimori, M. Satoh, C. A. Von Mühlen, L. E. C. Andrade // Lupus – 2016.
15. Covini G. Cytoplasmic rods and rings autoantibodies developed during pegylated interferon and ribavirin therapy in patients with chronic hepatitis C / G. Covini, W. C. Carcamo, E. Bredi, C. A. Von Mühlen, M. Colombo, E. K. L. Chan // Antivir. Ther. – 2012.
16. Damoiseaux J. International consensus on ANA patterns (ICAP): the bumpy road towards a consensus on reporting ANA results / J. Damoiseaux, C. A. von Mühlen, I. Garcia-De La Torre, O. G. Carballo, W. de Melo Cruvinel, P. L. C. Francescantonio, M. J. Fritzler, M. Herold, T. Mimori, M. Satoh, L. E. C. Andrade, E. K. L. Chan, K. Conrad // Autoimmun. Highlights – 2016.
17.  Douvas A.S. Identification of a nuclear protein (Scl-70) as a unique target of human antinuclear antibodies in scleroderma / A. S. Douvas, M. Achten, E. M. Tan // J. Biol. Chem. – 1979.
18. Fritzler M.J. The discovery of GW bodies / M. J. Fritzler, E. K. L. Chan // Adv. Exp. Med. Biol. – 2013.
19. Guldner H.H. Scl 70 autoantibodies from scleroderma patients recognize a 95 kDa protein identified as DNA topoisomerase I / H. H. Guldner, C. Szostecki, H. P. Vosberg, H. J. Lakomek, E. Penner, F. A. Bautz // Chromosoma – 1986.
20. Herold M. International Consensus on Antinuclear Antibody Patterns: Defining negative results and reporting unidentified patterns // Clin. Chem. Lab. Med. – 2018.
21. John Calise S. Anti-rods/rings: A human model of drug-induced autoantibody generation / S. John Calise, G. D. Keppeke, L. E. C. Andrade, E. K. L. Chan // Front. Immunol. – 2015.
22. Kang, W.-I. Lee // Korean J. Lab. Med. – 2009.
23. Keppeke G.D. Longitudinal Study of a Human Drug-Induced Model of Autoantibody to Cytoplasmic Rods/Rings following HCV Therapy with Ribavirin and Interferon-α / G. D. Keppeke, E. Nunes, M. L. G. Ferraz, E. A. B. Silva, C. Granato, E. K. L. Chan, L. E. C. Andrade // PLoS One – 2012.
24. Keppeke G.D. Temporal evolution of human autoantibody response to cytoplasmic rods and rings structure during anti-HCV therapy with ribavirin and interferon-α / G. D. Keppeke, M. Satoh, M. L. G. Ferraz, E. K. L. Chan, L. E. C. Andrade // Immunol. Res. – 2014. – Т. 60 – № 1 – 38–49с.
25. Mack G.J. Autoantibodies to a group of centrosomal proteins in human autoimmune sera reactive with the centrosome / G. J. Mack, J. Rees, O. Sandblom, R. Balczon, M. J. Fritzler, J. B. Rattner // Arthritis Rheum. – 1998.
26. Mahler M. The Clinical Significance of the Dense Fine Speckled Immunofluorescence Pattern on HEp-2 Cells for the Diagnosis of Systemic Autoimmune Diseases / M. Mahler, M. J. Fritzler // Clin. Dev. Immunol. – 2012.
27. Mahler M. Anti-DFS70/LEDGF antibodies are more prevalent in healthy individuals compared to patients with systemic autoimmune rheumatic diseases / M. Mahler, T. Parker, C. L. Peebles, L. E. Andrade, A. Swart, Y. Carbone, D. J. Ferguson, D. Villalta, N. Bizzaro, J. G. Hanly, M. J. Fritzler // J. Rheumatol. – 2012.
28. Moser J.J. Relationship of other cytoplasmic ribonucleoprotein bodies (cRNPB) to GW/P bodies / J. J. Moser, M. J. Fritzler // Adv. Exp. Med. Biol. – 2013.
29. Muro Y. High concomitance of disease marker autoantibodies in anti-DFS70/LEDGF autoantibody-positive patients with autoimmune rheumatic disease / Y. Muro, K. Sugiura, Y. Morita, Y. Tomita // Lupus – 2008.
30. Nakamura M. Clinical significance of autoantibodies in primary biliary cirrhosis / M. Nakamura // Semin. Liver Dis. – 2014.
31. Neves S.P.F. IV Brazilian Guidelines for autoantibodies on HEp-2 cells / S. P. F. Neves, J. Rêgo, B. HurTaliberti, L. M. E. dos Anjos, V. Valim, R. R. Alvarenga, M. B. Santiago, L. E. C. Andrade, N. Z. Maluf, C. Bueno, K. M. C. Pereira, F. de A. Brito, A. Dellavance, P. L. C. Francescantonio, C. D. A. Bichara, F. I. e Araújo, E. S. D. de O. Bonfá, C. L. P. Mangueira, C. A. von Mühlen, D. G. Carvalho, W. de M. Cruvinel, W. S. dos Santos, M. de F. Bissoli // Rev. Bras. Reumatol. (English Ed. – 2014)